（2）薄膜过滤法 薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的da过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。
取照上述“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml或10c㎡的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液中，混匀，过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。
若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。按表1规定条件培养、计数。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
试验所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从jun种保藏中心获得的冷冻干燥jun种为第 0 代），并采用适宜的jun种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。培养基适用性检查的jun种及新鲜菌体培养见表 1。
表 1培养基适用性检查、方法适用性试验、抑菌效力测定用的试验菌培养条件
试验菌株 试验培养基 培养温度 培养时间
1、金黄色putao球菌
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基
30～35℃
18～24小时
2、铜绿假单胞菌）
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基
30～35℃
18～24小时
3、大肠埃希菌
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大
豆胨液体培养基
30～35℃
18～24小时
4、白色nian珠菌
沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡
萄糖液体培养基
20～25℃
24-48小时
5、黑曲霉
沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡
萄糖液体培养基
20～25℃5～7天或直到获得丰富的孢子
操作注意事项
1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。
2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，病原微生物检测室，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在 1 小时内操作完毕。
3.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否灭菌及检验过程是否无菌操作。
4.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 营养琼脂中加入 1mL0.5 ％的TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而药品的颗粒颜色无变化。
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