取包装完好的供试品5份，取适量供试品分别转移至5个适宜的无菌容器中，每一容器接种一种试验菌，蛋白琥珀酸铁为3类供试品，工作台微生物分析方法验证，3类供试品中1g或1ml接种菌量为105～106cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的0.5%～1%，充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。然后将接种的供试品在试验期间置20～25℃，避光贮存，贮存温度的变化应尽可能控制在小范围，并防止被污染。
微生物限度检查
（4）需用特殊方法制备供试液的供试品
膜剂供试品 取供试品，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，纯化水微生物分析方法验证，制成1：10的供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品，加入pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂），置45℃水浴中，振摇，使溶解，制成1：10的供试液。必要时，微生物分析方法验证，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
气雾剂、喷雾剂供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，表面微生物分析方法验证，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。用无菌zhu射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检查。
贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布），避免贴膏剂粘贴在一起。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀释液的容器中，振荡至少30分钟。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
3.抗jun活性的去除或灭活
供试液接种后，按下列“微生物回收” 规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌落数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。
（1）增加稀释液或培养基体积。
（2）加入适宜的中和剂或灭活剂。
中和剂或灭活剂（表2）可用于消除干扰物的抑菌活性，zui好在稀释液或培养基灭菌前加入。若使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量稀释液替代供试品同试验组操作，以确认其有效性和对微生物无毒性。中和剂或灭活剂对照组的菌落数与菌液对照组的菌落数的比值应在0.5～2 范围内。
（3）采用薄膜过滤法。
（4）上述几种方法的联合使用。
若没有适宜消除供试品抑菌活性的方法，对特定试验菌回收的失败，表明供试品对该试验菌具有较强抗jun活性，同时也表明供试品不易被该类微生物污染。但是，供试品也可能仅对特定试验菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以该稀释级供试液作为zui低稀释级的供试液进行供试品检查。
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